根據(jù)FDA個藥指南及CDE（國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心）建議，需進行體外溶出研究、磷酸鹽動力學結(jié)合研究和磷酸鹽平衡結(jié)合研究，以及體內(nèi)臨床藥效終點研究，來評價受試制劑和參比制劑生物等效性研究。
截至目前醋酸鈣、碳酸鑭咀嚼片或顆粒、碳酸司維拉姆干混懸劑國內(nèi)已有多個廠家通過一致性評價，但枸櫞酸鐵片目前國內(nèi)還未有仿制藥上市。該品種體外磷結(jié)合等效性評價的方法是非常關(guān)鍵的部分，但該研究具體有哪些挑戰(zhàn)及關(guān)鍵注意事項？本文將結(jié)合指導原則要求與我司前期經(jīng)驗進行具體討論與分析。
一、體外磷酸鹽結(jié)合等效性評價標準
FDA及CDE頒布的指導原則中，不同磷結(jié)合劑的體外等效性評價標準匯總?cè)缦拢?br />
▍復雜代謝路徑
枸櫞酸鐵在胃腸道中主要通過局部結(jié)合磷酸鹽發(fā)揮作用，而非系統(tǒng)性吸收，傳統(tǒng)血藥濃度檢測方法難以直接評估其生物等效性。
▍替代指標選擇
需依賴體外磷酸鹽結(jié)合能力、鐵釋放速率等替代參數(shù)，結(jié)合臨床終點（如血磷下降幅度、鐵代謝指標）進行綜合判斷。
▍方法學局限性
體外試驗無法完全模擬人體胃腸環(huán)境（如pH波動、食物成分干擾），需通過多批次重復試驗和交叉驗證提高數(shù)據(jù)可靠性（要求至少n=12）。
▍支持監(jiān)管申報
FDA和EMA、NMPA均要求提交體外結(jié)合試驗數(shù)據(jù)作為仿制藥開發(fā)的必要證據(jù)，以證明與原研藥的理化特性一致。
三、實驗設計研究要點
▍磷酸鹽濃度
結(jié)合試驗應至少包含8個不同的磷酸鹽濃度，包括達到結(jié)合平臺的最高磷酸鹽濃度，約最高磷酸鹽濃度1/10的最低磷酸鹽濃度，以及介于最高和最低之間的其余磷酸鹽濃度。
▍磷酸鹽動力學結(jié)合研究測定時間點
每個條件下應在24 h內(nèi)選擇至少8個時間點。需特別注意達到平臺期前的時間點不能太少，以反映受試制劑和參比制劑動力學變化趨勢。
▍磷酸鹽平衡結(jié)合研究濃度和孵育時間
平衡研究磷酸鹽的濃度需結(jié)合正常體內(nèi)每天攝入磷酸鹽量，制劑規(guī)格，溶液體積等綜合評定。孵育時間根據(jù)動力學達到穩(wěn)態(tài)的時間進行合理選擇。
▍pH監(jiān)控
對于動力學和平衡試驗都需要提供詳細的pH監(jiān)控方法、記錄、間隔時間等。
四、實驗設計研究要點
重點參考中國藥典9012《生物樣品定量分析方法驗證指導原則》，需要考察系統(tǒng)適用性、定量限、準確度、精密度、稀釋可靠性、耐用性、殘留、基質(zhì)效應、膜吸附、穩(wěn)定性等，以驗證方法準確可靠。
干擾考察：如加入了BES等pH穩(wěn)定劑來配制磷酸鹽，還需要考察BES對磷酸鹽結(jié)合的影響，另外還需要考察輔料、原料藥、空白制劑對磷酸鹽檢測的干擾。
建議進行ISR研究，以考察方法的準確性。
所有資料都需要按照等效性評價相關(guān)要求提供，如制劑來源、質(zhì)檢報告，分析計劃、分析報告、進樣序列表、標曲質(zhì)控匯總表等。
五、體外磷結(jié)合藥動學及平衡研究曲線
六、體外磷結(jié)合研究其他應用
除了抗高磷血癥藥物外，對于可能導致低磷血癥的補鐵劑（如蔗糖鐵、羧基麥芽糖鐵），也可以通過體外磷結(jié)果試驗評估藥物與磷酸根的結(jié)合能力，從而預測其在體內(nèi)引起低磷血癥的風險，為臨床用藥提供安全性依據(jù)。
湖南科銳斯醫(yī)藥的磷酸鹽動力學和磷酸鹽平衡結(jié)合研究平臺，已成功開發(fā)了碳酸鑭咀嚼片、枸櫞酸鐵片分析方法，并已經(jīng)助力客戶完成該品種體外磷酸鹽等效性評價研究。
專業(yè)團隊：以高級工程師領銜的核心骨干團隊成員56人，本科及以上比例100%，碩士及以上占比41%。
質(zhì)量體系：取得中國合格評定國家認可委員會（CNAS）實驗室認可證書。實驗過程采用電子化信息系（LIMS）統(tǒng)進行全流程的記錄管理和生物樣本管理，并建立了滿足中美雙報的中英文體系。
特色品種：
外用制劑：洛索洛芬鈉凝膠貼膏、丙酸氟替卡松乳膏等
復方制劑：復方甘草酸苷等
內(nèi)源性物質(zhì)：熊去氧膽酸、二十碳五烯酸等
體外磷結(jié)合劑：枸櫞酸鐵等
